Cromatografia Planar na Análise de Qualidade de Alimentos

O Instituto de Farmacologia Veterinária e Toxicologia ( IVPT Gmbh ) em Bernau, próximo a Berlin é uma instituição privada.
Desde sua fundação em 1991, o instituto está empenhado na pesquisa e prestação de serviços nos campos de resíduos tóxicos de drogas veterinárias, substâncias indesejáveis e análise de alimentos.

O Instituto está voltado para análises dentro da cadeia solo - planta - animal - alimento ( de origem vegetal ou animal ).Os estudos são conduzidos de acordo com a legislação aplicável.

O IVPT** Gmbh detém o certificado de conformidade GLP e está indicado para o DIN EN 45011 (Atestando a conformidade para análise de alimentos, particularmente os de origem animal, bem como frutas e vegetais).

Para os estudos, modernos equipamentos analíticos são empregados. GC/MS, HPLC, GPC, eletroforese gel, e CROMATOGRAFIA PLANAR. Esta última representa uma grande opção entre as diversas técnicas disponíveis, como será demonstrado a seguir.

DETERMINAÇÃO DE HISTAMINA EM PEIXES DE DERIVADOS POR HPTLC

ESCOPO:

Quando um peixe não é armazenado de maneira adequada, as proteínas podem degradar para formar aminas, especialmente histamina. A quantidade de histaminas presente na amostra determina o seu nível de degradação. O nível máximo de histamina é estabelecido por um decreto referente às exigências sanitárias para produtos de pesca. As indústrias são obrigadas a avaliar a concentração de histamina nos peixes que chegam para serem industrializados.

PRINCÍPIO

A histamina é extraída com metanol de uma amostra homogeneizada e separada da matriz numa placa de HPTLC. Após o desenvolvimento da placa a avaliação é realizada com densitometria clássica ou vídeo densitometria.

PREPARAÇÃO DA AMOSTRA E PADRONIZAÇÃO

10g de amostra é homogeneizada com 20ml de metanol, e então centrifugado por 10 min a 4000 rpm.
O sobrenadante é usado para cromatografia.

Solução padrão:
16,6 mg de dihidrocloreto de histamina (C₅H₉N₃ 2HCl) = 10 mg de histamina dissolvidos em 10 ml de água.

Padrão de calibração:
250ul da solução padrão diluídos em 10 ml de metanol.

APLICAÇÃO DA AMOSTRA

Placas Usadas: Placas para HPTC Merck RP-18WF2545 20X10 ou 10X10. A aplicação da amostra foi feita com LINOMAT com bandas de 6mm.

Aplica-se 10ul da amostra sobre a placa. Aplica-se também 2, 5, 10, 15 e 20 ul da solução de calibração de calibração ( correspondendo a 10, 25, 50, 75 e 100 mg de histamina / Kg de amostra).

Se por ventura o conteúdo de histamina da amostra exceder a faixa de calibração, a amostra deve ser diluída e novamente "cromatografada".

CROMATOGRAFIA

Na Câmara de desenvolvimento horizontal CAMAG usando N-propanol – 25% Amônia 4:1 sem saturação da câmara, desenvolvendo distância de 80 mm ( @ 30 minutos).

A placa é seca e imersa no reagente de Pauly.A histamina reage, resultando em pontos marrons em fundo amarelo.

REAGENTE PAULY

SOLUÇÃO I : 0,9 g de ácido sulfanílico aquecido em 9 ml de HCl concentrado, filtrando e ajustado para um volume final de 100 ml. Esta solução é estável em geladeira por até 4 semanas.

SOLUÇÃO II : 4,5 g de Nitrato de sódio em 100 ml de água. Preparo diário.

SOLUÇÃO III: 10 g de carbonato de sódio em 100 ml de água.

REAGENTE DE IMERSÃO: 50 ml das soluções I e II misturados em 100 ml da solução III. Deve ser preparada diariamente.

Realizada em fotodensitômetro TLC Scanner 3 com software CATS, em 530 nm, com cálculo de área de pico com regressão polinomial.

Alternativamente pode ser usado também vídeo store/ vídeo scan sob luz branca direta.

A avaliação com tecnologia em vídeo em a vantagem de resultados negativos poderem ser documentados.

DISCUSSÃO:

O método ilustrado possibilita obter resultados de histamina com boa reprodutibilidade e simplicidade em amostras de peixe fresco e derivados. O procedimento descrito é muito mais rápido e econômico se comparado com a técnica de HPLC.

* Dr. Manfred Stoyk, Institute for Veterinary Pharmacology and toxicology Gmbh, Weissenseer str. 36 D-16321 Bernau
** Director: Prof. Dr. sc. Med. Vet. K. Lusky
FONTE: CBS - Camag Bibliografy Service – September 99 volume 83
TRADUÇÃO - Micronal S/A